别人的研究生是这么读的!你汗颜了吗?

文章来源:小木虫论坛

作者:Henry_jie      编辑:颜惜

领到毕业证那一刻,我傻傻地问了一下,“这就毕业啦?就这么简单?”几个工作人员忽然笑了,“就这么简单呀,要不还要怎样?”有点恍惚,有点不知所措,喃喃自语地远离这繁华的人群,一个人拿着毕业证在林间的小道中悠悠地走着。

研究生,我学到了什么?我得到了什么?不同于本科时的无知,大学毕业没有什么感觉,只是一个毕业而已,可此刻我却无法平静。

研一在北京总部学了一年的理论课,教课的老师都是业内的大牛,大学所用的课本都是由他们编纂的。昔日看着他们编著的课本,觉得都是精华,都让人很受用,却想不到有一天可以在课堂上聆听他们的本人授课。十几位老师,印象最深的当属北大的罗教授,他是生物信息学领域里的专家,是一位非常严谨而又有点可爱的老先生(其实年纪不大,刚六十左右),教授我们生物信息学。他知识渊博,身体力行,严格要求学生,并且尽可能地为学生创造一切可能创造的学习环境。生物信息学课上,几乎是手把手地教,一步一步地展示,甚至因为学校的网路慢,最后还带着学生到北大计算机系上课。他和他的团队还创建了ABC网站,把生物领域里的各类网站整合在一起,很适合人们的查询。只是,他总是充满着无奈。他是一个思想超前的人,也有许多想法,多年前就想与人共同为中国的生物信息学创建一个国际间的联盟,只是因无人支持作罢,后来就著书立传。十天的授课,很仓促,他也很无奈,只希望在较短的时间里把知识输送给学生,至于他们能掌握多少,就靠自己的理解程度了。

在北京时,我接待了导师的一个美国友人,却也闹出了不小的笑话。他是一个地道的美国人,讲着一口快速迅疾的美式英语,却不会说一句汉语。我呢,读写英语没问题,说也能说一些,虽然口语不行,但足够外国人理解。听可是最大的弱点,中式英语多少还能理解,英式英语也能勉强懂一点儿,至于浪漫的美国人说的英语,我只能望尘莫及——太快了,还没明白过来,对方就已经说完了。于是,出现了一个最为尴尬和不合格的导游——随身携带着纸片,老外说话我没听懂时,就让他写下来,然后用我蹩脚的中式英语回答(他也能懂)。就这样,我竟然带着他在北京城玩了三天,最后又用我洋洋洒洒的中式英语写了一篇四千多字的“Chinese Introduction”送给他做礼物。几天下来,我的英语口语和听力似乎都有了很大的提高,那三天,也趁着大好的机会,大胆地展示了我的杰式英语(现在想想,丢人都丢到国外了)。

从北京离开回到研究所时,我的科研生涯才算是刚刚开始。在这里,我遇到了许多值得我敬佩、对我帮助许多的老师同学,他们都是值得我感激的人。

我导师,五十多岁的人了,为了我的试验,不惜亲自下基地操刀做手术并指点我,让我学到了 Sika deer 人工授精(技术要领知道,操作不熟)、动物静脉采血、睾丸穿刺、活体采卵、采精、冻精,这些都是从导师那里学到的,那里的一切都是导师赠予的,导师之恩无以言表。

胖老哥四十多岁的人了,学习热情不减,本专业为计算机编程,是个通才,教书可以,维修电器可以,做生物实验不比年轻人差,从头做起,繁殖技术试验他都精通,而且还独自发明了 Sika deer 采精器并申请专利,甚至远销上海等江南之地(我曾见证了他把图纸变成零件、再组装成一个完整采精器的过程,一整天呆在实验室,不为外事所扰,专注于一件事,我也跟着学,只是没学会)。小鼠冲胚、小鼠结扎(我的成功率不高,死亡率较大)、小鼠人工授精、胚胎融合等都是从他那里学到的,他是我最信赖的一个人,也曾经对他许下诺言:他日杰若发达,汝子寻我,我必助他一臂之力。

瘦老哥将近五十岁的人了,已贵为教授,依旧在不停地耕耘,凌晨一两点尚在办公室书写材料,做实验亲力亲为,是一个人把理论与实践推广结合起来的老师。团队首席,归国学者,学校“千人计划”一员,理论先进、技术高超,是年轻科研工作者中的佼佼者,是我硕士课题的规划者和支持者。

大师姐,中科院博士,是我的小导师,我一身生物本领、技术全是她所教,科研习惯、科研准则也是从她那里学到的,论文书写、实验指导全赖于她,大师姐之恩无以言表。大师兄,异地他乡之长兄,生活关心、迷茫解惑、节日庆祝,让我感受到家的温暖。实验室其他老师、师弟师妹都曾在我试验过程中指导或帮助过我,让我受益匪浅。虽然那些个场景都已经过去了,但这份恩情永远存在于我心中,他们是我在他乡的朋友,是值得我回忆和记住的人。

试验技术呢?我学到了什么?又有哪些值得自己称道和与人说的呢?

生殖细胞的捡卵、培养这些是动物繁殖最基本的。最初培养液是自己配制的,按照配方在无菌的环境下配制,固体的称量、液体的称取,高精度的天平、准确适当的量筒,差一毫多一厘都是不行的,培养液的PH值、渗透压都要测定,激素的添加、生长因子的添加,每一种药品都是至关重要的,都要谨慎对待。第一次配制,先后配了四次才得到成功,后来买成品,也算是减轻了一些负担。用捡卵管捡卵时,练得嘴肿时才算是熟练捡出。超净工作台无菌操作,细胞培养箱无菌环境,从这一处移到另一处,每一环节都要高度重视。至于冲胚,则是为了获得特定时期的胚胎,主要在小鼠上应用。先给小鼠做超排处理,先打PMSG(孕马血清促性腺激素),48h后打HCG(人绒毛膜促性腺激素),然后公母合拢交配(0日),第二日(1日)检查母鼠生殖道,查看是否有栓(公鼠精斑),有栓者为交配成功者,下午取输卵管,从膨大部扎卵可获得1细胞(显微镜下呈双核),2日从壶腹部冲卵,可得2细胞,3日四细胞(带子宫冲),4日八细胞~十六细胞,6日左右可得囊胚(个人实验所得结果,不代表标准)。体外冲胚可获得体内成长的胚胎,较体外培养的胚胎更能反映问题。胚胎融合则是将两个胚胎融合在一起,可制作嵌合体动物(生命研究),也可制作联体动物(也不知道有啥意义),十六细胞时去透明带(酶消化和机械去除两种方法),将两细胞亲密接触,让其自然融合在一起,待其成为一体后即可做后续实验(尝试实验,不曾深做)。

体细胞的培养,取组织,75%酒精消毒,PBS(磷酸缓冲液,实验室常用品)洗涤,胰酶消化,可铺块培养,也可全消化培养,后者较好,胶原酶消化强度更大,不易溶解组织可用胶原酶消化。待长至75%丛聚时,可传代培养。做药物对细胞影响效果实验时,可以检测细胞增殖活性、细胞凋亡、细胞周期等指标,分别反映药物对细胞不同生理功能的影响。细胞增殖活性可用MTT或CKK试剂盒结合酶标仪检测,细胞凋亡和周期可用Annexin V-FITC/PI结合流式细胞仪或者共聚焦显微镜检测,结果用FlowJo软件或者Image J软件分析。操作容易损失细胞,一定要保证细胞数量。不可用细胞刮刀刮细胞,用胰酶消化就可。胰酶成品较好,自己配制效果不好。冷冻、测定活力、解冻是细胞长期保存的环节。

DNA的提取可以做普通PCR(聚合酶链反应),也可以测序等,测定血缘关系。RNA的提取,可以反转录成cDNA,进而做荧光定量PCR,探索不同基因的表达水平。蛋白提取可以做Western blotting,检测不同蛋白表达水平,这里需要用到各类抗体,一抗需要是辣根酶标记(HRP)的抗体,二抗作用是抗一抗,与一抗反应进而表达。免疫荧光可以做细胞的蛋白/基因定位,或者表达强弱,也需要抗体,一抗是需要有这个符号(H+L)的抗体(啥意思,忘了)。ELISA实验、免疫组化、分子克隆、细胞转染等都是最基本的分子学实验,也是实验过程中常用到的,都应该基本掌握。基因的表达检测需要设计引物,引物的设计及测序结果的查看,可用NCBI网站上的生物工具结合Primer5、DNAStar、MEGA6.0等软件进行。图形的整合修理可借助Photoshop或者Adobe Illustrator软件进行,图标的绘制则可用GraphPad Prism进行,若Excel表格玩得转,它里面的用途可不少(我不太喜欢用它)。

动物克隆是一个传统热点,它的基础是显微注射,这是生殖领域里的一个重要手段,理论和技术都要掌握,技术需要通过大量地训练可实现(我只掌握了理论,技术还真没有掌握)。基因编辑和基因敲除是一个新热点,与未来生命研究息息相关,它的基础是生殖细胞的培养和显微注射。干细胞的研究、细胞骨架的研究、蛋白功能的研究本人认为将很快超越克隆等传统热点,成为更大的热点(过去已经是热点了),是生命领域里又可创造科学家的摇篮(个人观点),未来可作为选专业的参考。目前,生命领域里二代测序已经广泛推广,三代测序也缓缓诞生,将测序技术与疾病诊断技术集合也早已成为一个热点,生命科学研究者可着重关注。从生殖角度来看,若将超声波或者射线技术与测序技术结合,利用全基因组序列创建波长库,通过用无形的线或光代替DNA样品进行测序,似乎可以很快地鉴定母体胎儿是否患病(纯粹遐想,不符合科学道理,见笑莫怪)。而某些大型仪器如激光共聚焦显微镜、荧光显微镜、小动物活体成像仪、显微操作仪、流式细胞仪、荧光定量PCR仪、凝胶成像仪、酶标仪、测序仪等各类高端仪器,仅仅会使用还是不够的,还要知道如何去分析结果以及如何调节可以获得最佳效果(这些仪器使用分析我给自己打个75分吧)。 

试验思维呢?又有哪些收获?导师给我个研究方向,其他让我自己去摸索(西式培养方式,我真吃不消)。我是如何做的呢?

先看近几年类似专业的硕博论文,看他们都做哪些东西,每个点再寻找单篇文献,先阅读中文期刊了解专业知识后,开始有目的地选择阅读英文论文。欧美国家的论文水平较高,可参考他们的,Science、Nature、Cell等杂志论文都是顶尖水平,可适当阅读。学会举一反三,学会近似推理,他研究这种药物对这类细胞的影响,那么这些测定的指标也可以应用在其他药物对其他细胞的影响。某些基因功能类似,他研究了这个家族的一种,那么你就可以探索另外一种。功能协同,功能拮抗,既要追根探底,又要适时转弯,这种药物可以影响细胞的某些功能,而这些功能与哪些蛋白或者基因有关呢?那么,我直接研究药物处理后基因表达水平,其变化是否是导致功能变化的缘由呢?是,则是一个结论;不是,则是另外一个结论。任何试验想法都要用一个故事去说明,有缘由,有结局,也有过程,要完整,要自然,有主线,有分线,最后用话把它讲出来,有理有据,不要瞎编乱造(改编首席语言,意思就是这个意思)。有功能变化,联想到蛋白变化,进而推到基因变化,由大到小,由小寻大。应该就这么多吧,自我心得体会,只适合本人(我科研水平不高,心得体会也是一般的想法)。

那么我产出多少呢?论文代表着科研能力和研究水平。研一已有不少同学发表了许多综述论文,有的甚至发表了英文论文(SCI)。研究生毕业,本所同学有的已发表了三四篇中文核心论文,我认识的几个外所的同学甚至发表了十篇中文论文,两篇SCI,这在科研上真的非常优秀了,国奖、优秀学生的获得者。

我呢?看起来做了不少工作,产出如何?真不敢恭维自己,一篇中文核心论文已经见刊(水平一般),花了几个月搜肠刮肚写了一篇英文论文发表的期刊也只是一点几分。科研水平不高,自我信心极为打击。之前曾尝试着追求一个美丽优秀的女孩,大有持之以恒的决心,在得知对方发表了三篇SCI,累积分值高达十分时,我终于说服自己放弃了。论文是一个人内在知识的外在表达,作为科研人员,它代表着科研能力和水平,若条件允许的话,尽可能地多发表论文,发表高质量的论文,这对未来考学求职都是至关重要的。优秀的人,就有优秀的作品。研究生最大的遗憾在于此,后来者可吸取教训。

就这么地毕业吧,就这么地简单。其实不复杂,做试验,书写毕业论文,完成答辩,导师把学位服帽子的挂缕从右侧拨到左侧后就代表正式毕业了。至于实验的苦、实验的烦躁,都只是过眼烟云,再回顾,只有对自己的敬佩,学到了那么多东西,吃点苦又咋的?

行了,学生生涯结束了,不需要留恋,迟早要步入社会的。以后好好工作,娶妻生子、养家糊口才是正道。

哎呀,长白山还没去呢,天池还没看呢,冰雕大世界还没欣赏呢,西藏还没游玩呢,大理还没艳遇呢,丽江还没见刘三姐呢……

留点遗憾,生活继续嘛。

(注:以上感受、实验论述皆是个人根据自我感悟、所做而得,非科普文章,不具有科学严谨性,只做生活消遣用。)

——2017年6月1日书写,7月9日整理

——谨献参加毕业典礼的杰

相关文章推荐